James Tolksdorf, in Dortmund geboren, begann sein Gesangsstudium an der Hochschule für Musik und Darstellende Kunst in Frankfurt a.M.. Nach dem dort abgelegten Vordiplom wechselte er auf Empfehlung des weltbekannten Baßbariton Simon Estes mit einem Stipendium zur renommierten Juilliard School nach New York City, um dort sein Studium erfolgreich abzuschließen.  

Neben seiner Tätigkeit als Opernsänger trat Tolksdorf als Solist u.a. in der Philharmonie Berlin, Leipziger Gewandhaus, mit Soloprogrammen im Konzerthaus Dortmund, Philharmonie Essen und Pavarotti-Center in Mostar (Bosnien) auf; sowie bei Live-Auftritten im Rundfunk und Fernsehen.

Zu seinen Partien zählen u.a. Jochanaan in Salome von Strauss, Verdi-Partien wie Jago in Otello, Rigoletto in der gleichnamigen Oper, Il Conte di Luna in Il Trovatore, Germont in La Traviata, Michele in Il tabarro von Puccini, den Sharpless in Madame Butterfly, sowohl als auch Wagner-Partien Kurvenal in Tristan und Isolde, Klingsor in Parsifal und den Holländer in Der Fliegende Holländer.

2015 gewann James Tolksdorf in Detmold den Theater- und Publikumspreis für seien herausragenden Leistungen.  

In dieser Theatersaison 2019/20 gibt er sein Debüt am Theater Hof als Enrico in Lucia di Lammamoor von Donizetti.